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Stemgent mRNA体细胞重编程系统

MicroRNA-Enhanced mRNA Re​programming System

产品信息

  Product Name Cat. No. Size Storage
Stemgent® mRNA Reprogramming Kit 00-0071    
Kit Contents:    
mRNA Reprogramming Factors Set: hOKSM 7×200 μl -70℃
B18R Recombinant Protein (0.5 mg/ml) 80 μl -70℃
Pluriton™ Reprogramming Supplement (2500×) 0.2 ml -70℃
Pluriton™ Reprogramming Medium 500 ml -20℃
Stemgent® microRNA Booster Kit 00-0073    
Kit Contents:    
microRNA Reprogramming Cocktail 2×35 μl -70℃
B18R Recombinant Protein (0.5 mg/ml) 80 μl -70℃
Stemgent® Stemfect™ RNA Transfection Kit 00-0069    
Kit Contents:    
Stemfect™ RNA Transfection Reagent 750 μl 4℃
Stemfect™ Buffer 35 ml 4℃

※ 上述三个试剂盒联合使用,能够满足9-10个Well(6-well plate format)内靶细胞的重编程。

 

产品特点

1.快速 Fast

Stemgent® MicroRNA-Enhanced mRNA Reprogramming System只需2周即可将靶细胞重编程为iPS细胞,与仙台病毒(Sendai Virus)、非整合型DNA载体(Episomal DNA Vectors)等传统iPS重编程方法相比,缩短实验周期超过50%以上(Figure. 1)。

Figure 1. Stemgent® mRNA重编程系统、仙台病毒依赖的重编程系统以及游离型DNA载体依赖的重编程系统重编程时程比较。

 

简便 Easy

与病毒、DNA载体依赖的iPS重编程手段不同,使用Stemgent® MicroRNA-Enhanced mRNA Reprogramming System对靶细胞进行重编程,生成的iPS细胞无需进行复杂耗时的下游筛选程序,只需简简单单6个步骤,即可轻松构建iPS细胞系。

  Description Day
Step 1 Material Preparation Prior to starting
Step 2 Plate Cells 0
Step 3 Transfect Cells 1 to 12
Step 4 Identify Cells 13-14
Step 5 Pick and Passage iPS Cell Colonies 15-16
Step 6 Maintain iPS Cell Cultures 16+

 

注:因所用细胞类型及实验条件不同,上述时间轴可能略有不同,仅供参考。

 

Figure 2. Stemgent® MicroRNA-Enhanced mRNA Reprogramming System重编程过程时间表、显微镜下观察到的重编程过程中靶细胞形态变化。第12天,形成的iPS克隆表达多能型Marker TRA-1-81。

 

高效 Efficient

病毒、DNA载体等依赖的iPS重编程技术,其重编程效率介于0.00001%到1%之间不等,而Stemgent® MicroRNA-Enhanced mRNA Reprogramming System的重编程效率远远大于1%,极大地提高了iPS克隆的产出率。

表1. 不同类型iPS重编程手段效率比较

Reprogramming Method Efficiency Integrating Screening
RNA >1% No No
仙台病毒(Sendai virus 0.01-1% No Yes
DNA载体(Episomal/Minicircle 0.00% Possible Yes
慢病毒(Lentivirus 0.001-0.01% Yes Yes
腺病毒(Adenovirus 0.0001-0.001% Possible Yes
Protein 0.00% No No

 

安全 Safe

某些iPS研究领域,例如iPS临床研究、治疗应用等,对iPS细胞的安全性提出了极高的要求。使用Stemgent® MicroRNA-Enhanced mRNA Reprogramming System重编程靶细胞,无需担心构建的iPS细胞系可能含有病毒载体残留,亦无需担心无关的基因整合进宿主基因组,是目前适用于临床研究及治疗的最理想选择。

而以仙台病毒(Sendai Virus)为载体的iPS重编程手段,其病毒基因组虽然不会整合进宿主染色体,仙台病毒本身也不具备复制能力,但是为了构建真正意义上的virus-free的iPS细胞系,通常需要经过一个10-20代、耗时费力的筛选过程,以确保最终得到的iPS细胞系无病毒载体残留。以慢病毒(Lentivirus)体的iPS重编程手段,病毒基因组能够永久整合进宿主基因组,会给后续的iPS细胞分析带来干扰。

 

高性价比 Cost Effective 

以仙台病毒为载体的iPS重编程试剂盒非常昂贵,综合重编程效率、时间及劳动力成本、安全性等多重考虑,Stemgent® MicroRNA-Enhanced mRNA Reprogramming System无疑是性价比的上乘之选。

 

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